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Julie Thibault

Caractérisation fonctionnelle et mécanisme de l'inhibition de ExsA, régulateur clef du Système de Sécrétion de Type III de Pseudomonas aeruginosa

Publié le 8 janvier 2010
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Thèse soutenue le 08 janvier 2010 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Discipline : Virologie, Microbiologie, Immunologie

Résumé :
L'expression des gènes codant pour le Système de Sécrétion de Type III (SST3), facteur de virulence majeur de Pseudomonas aeruginosa, est activée par ExsA. Ce facteur de transcription appartient à la famille des régulateurs de type AraC/XylS caractérisés par un domaine de fixation à l'ADN comportant deux motifs hélice-tour-hélice. L'activité de ces protéines est généralement régulée par la fixation d'un ligand sur un domaine supplémentaire non conservé. Ce ligand peut être de nature protéique dans le cas de certains régulateurs contrôlant la synthèse de SST3. Ainsi, l'activité transcriptionnelle de ExsA est inhibée par l'anti-activateur ExsD.
L'étude de la fonctionnalité de ExsA et de ses domaines par des approchesin vitro et in vivo a révélé que le domaine C-terminal de ExsA est bien le domaine de fixation à l'ADN et que deux monomères se fixent sur le promoteur de l'opéron des gènes de régulation du SST3 (pC). Ce domaine isolé possède une affinité pour pC et une activité transcriptionn​elle inférieure à celle de ExsA. En effet, la fixation efficace de ExsA sur le promoteur pC requiert sa dimérisation à travers son domaine N-terminal. La dernière hélice α de ce domaine N-ter semble jouer un rôle majeur dans la dimérisation de ExsA. Le deuxième objectif de ma thèse était de comprendre l'interaction entre ExsA et ExsD et d'identifier le mécanisme grâce auquel l'inhibiteur empêche ExsA d'activer la transcription des gènes du SST3. Après co-production des deux protéines, le complexe ExsA/ExsD a été purifié puis caractérisé. ExsA et ExsD forment un complexe hétérodimérique au sein duquel l'inhibiteur empêche le facteur de transcription de se fixer à l'ADN.

Jury :
Président : Dominique Schneider
Rapporteur : Sophie de Bentzmann
Rapporteur : Claude Parsot
Examinateur : William Nasser
Examinateur : Ina Attrée
Examinateur : Sylvie Elsen

Mots-clés :
Pseudomonas aeruginosa, Système de Sécrétion de Type III, Activateur de transcription, Régulateurs transcriptionnel de type AraC/XylS, Interaction protéine/protéine, Interaction ADN/protéine, Anti-activateur protéique

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